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掃描電子顯微鏡（SEM）可以拍攝細胞圖像，但需要進行特殊的樣品制備步驟來保證細胞在高真空環境下的穩定性和形態保真。以下是細胞樣品制備和成像的詳細步驟：

1. 樣品固定

目的：

固定細胞以保持其結構和形態。

方法：

化學固定：常用的固定劑包括戊二醛（2.5-4%）和甲醛（2-4%），可以有效地固定細胞膜和內部結構。將細胞培養物放入固定劑中，通常需要固定30分鐘到1小時。

用緩沖液（如磷酸鹽緩沖液PBS）反復沖洗，以去除多余的固定劑。

2. 脫水

目的：

去除細胞中的水分，避免在真空環境下蒸發。

方法：

梯度乙醇脫水：使用一系列逐漸增加濃度的乙醇溶液進行脫水（30%、50%、70%、90%、100%）。每個濃度處理時間為10-15分鐘，在純乙醇中處理兩次，每次10-15分鐘。

3. 干燥

目的：

將細胞樣品完全干燥，避免在真空環境下產生形變。

方法：

臨界點干燥：使用臨界點干燥儀，通過二氧化碳臨界點干燥技術將樣品干燥，這是常用的方法。樣品在液態二氧化碳中處理，然后通過臨界點干燥將液態二氧化碳轉換為氣態，避免液體表面張力導致的樣品形變。

4. 樣品涂層

目的：

提高樣品的導電性，防止充電效應，獲得更清晰的圖像。

方法：

金屬涂層：在樣品表面沉積一層導電材料（如金、鉑或碳）。使用濺射鍍膜儀或蒸發鍍膜儀進行涂層，確保涂層均勻且厚度適中（通常在幾納米到幾十納米之間）。

5. 樣品安裝

目的：

將樣品固定在SEM的樣品臺上，確保穩定成像。

方法：

導電膠固定：使用導電膠或碳膠帶將樣品固定在樣品臺上，確保接觸良好。樣品臺需清潔，樣品應牢固固定，避免成像過程中移動。

6. 成像

目的：

使用SEM進行細胞成像。

方法：

調整顯微鏡設置：

選擇適當的加速電壓（通常在1-20 kV范圍內，具體取決于樣品和成像需求）。

設置合適的探針電流和孔徑，確保獲得清晰圖像。

使用低真空模式（如果可用）減少樣品充電效應。

優化成像參數：

逐步調整對焦和像散校正，使圖像達到適合的清晰度。

使用不同的檢測器（如二次電子檢測器和背散射電子檢測器）獲得不同信息的圖像。

注意事項

樣品處理過程需小心：避免在各個步驟中損壞細胞結構，尤其是在固定和干燥過程中。

環境控制：樣品制備過程在干凈、無塵的環境中進行，避免污染。

操作人員需熟練：樣品制備和SEM操作需要一定的專業知識和經驗，確保獲得高質量的圖像。

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